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寒地养殖
Cold farming

肉牛口蹄疫不同免疫程序免疫效果比较

摘自:黑龙江畜牧兽医杂志社发布时间:2018-02-12作者:admin浏览次数:870

      口蹄疫是由口蹄疫病毒引起的以感染偶蹄动物为主的急性、热性、高度传染性疫病,世界动物卫生组织(OIE)将其列为烈性动物传染病,我国规定其为一类动物疫病。
      在进行口蹄疫疫苗免疫的过程中,因为存在牛只个体差异、免疫间隔期长等因素,部分牲畜免疫后期抗体效价达不到抵御外界病毒侵袭的水平,不能使畜群得到有效的免疫保护[1]。为了完善免疫程序,笔者进行了口蹄疫灭活疫苗临床免疫效果试验,现将试验结果报道如下,供同行参考。
       1 材料
       1.1 试验动物
  按照永宁县肉牛养殖分布情况,选取全县6个乡镇15户的90头肉牛(2~6岁的健康牛)作为试验对象。
       1.2 试验疫苗
  试验全部采用口蹄疫O型-亚洲Ⅰ型-A型三价灭活疫苗(生产批号为4235046),金宇保灵生物药品有限公司产品。
      1.3 抗体检测仪器
  酶标分析仪(型号为DNM-9602)、全自动酶标洗板机(型号为DNX-9620),北京普朗新技术有限公司产品;低速大容量台式离心机(型号为TDL-5),金坛市医疗仪器厂产品;电热恒温培养箱(型号为HH.B11500DR),上海跃进医疗器械厂产品;移液器,购于上海大龙医疗设备有限公司;立式压力蒸气灭菌器(型号为LS—B35L),江阴滨江仪疗设备厂产品;96孔ELISA板、U型96孔抗原抗体反应板、封板膜等,购自中国农业科学院兰州兽医研究所。
      1.4 检测试剂
  口蹄疫O型(批号为2015030401-3)、口蹄疫亚洲Ⅰ 型(批号为20150305102-1)、A型(批号为20150306103-1)抗体检测液相阻断(LB-ELISA)试
剂盒,购自中国农业科学院兰州兽医研究所。
      2 方法
      2.1 试验时间和期限
  试验从2015年2月份开始,至2015年12月份结束。
      2.2 试验设计方案
  将所选肉牛随机分成A、B、C三个试验组,每组30头牛。A组按照疫苗使用说明书于2015年3月15日和9月15日注射2次口蹄疫O型-亚洲Ⅰ型-A型三价灭活疫苗,每头1.00mL;B组于2015年3月15日和9月15日注射2次口蹄疫O型-亚洲Ⅰ型-A型三价灭活疫苗,每头2.00mL;C组分别于2015年3月15日、7月15日和11月15日注射3次口蹄疫O型-亚洲Ⅰ型-A型三价灭活疫苗,每头2.00mL[2]。
  定期采集试验动物血样进行免疫抗体检测,通过对同种疫苗不同免疫时期和次数产生的免疫抗体水
平进行分析,绘制免疫抗体消长曲线,找出抗体水平变化规律,确定最佳免疫次数,制订永宁县口蹄疫最佳免疫程序[3-4]。
      2.3 采样方法
  各试验组分别于C组免疫前第30天、免疫后第30天进行采血,即2015年2月15日、4月15日、6月15日、8月15日、10月15日、12月15日进行采血。每头试验牛每次无菌采集颈静脉血液10mL,分离血清,进行免疫抗体效价检测。
       2.4 检测方法
  免疫抗体检测采用液相阻断ELISA法,通过预先滴定好的固定量病毒抗原与被检血清首先在液相中反应,然后将抗原抗体复合物转移到包被了口蹄疫特异性抗体ELISA板中,没有完全被血清抗体阻断的病毒抗原被ELISA板中的抗体捕获,亦与随后加入的豚鼠抗血清中的抗体结合,再通过兔抗豚鼠IgG酶结合物和底物溶液显色[5-6]。按试验孔呈现的颜色与抗原对照(未加血清)孔呈现的颜色相比较,判定结果。抗体效价以能阻断50%病毒抗原的血清稀释度表示。
       3 结果与分析
       3.1 试验结果
  从2015年2月15日至2015年12月15日,共对A、B、C三组的90头试验牛进行了6次采血,应用免疫抗体检测液相阻断ELISA法对免疫抗体效价进行了检测,结果见表1。
       3.2 结果判定根据牛O型、亚洲Ⅰ型、A型血清抗体效价与保护力的关系:抗体效价以≥1∶128的效价为标准,效价≥1∶128,99%以上保护;效价以≤1∶16不保护;效价在1∶22~90之间,50%保护,结果见表2和图1~3。
       3.3 结果分析
  由表2和图1可知:C组自第1次注射牛口蹄疫疫苗后,O型口蹄疫免疫抗体保护率常年处于66%以上,而A、B组的抗体保护率在免疫空白期只有50.00%、56.67%。
  由表2和图2可知:C组自第1次注射牛口蹄疫疫苗后,亚洲Ⅰ型口蹄疫免疫抗体保护率常年处于
66%以上,而A、B组的抗体保护率在免疫空白期只有46.67%、56.67%。
  由表2和图3可知:C组自第1次注射牛口蹄疫疫苗后,A型口蹄疫免疫抗体保护率常年处于66%以上,而A、B组的抗体保护率在免疫空白期只有46.67%、53.33%。
  A组在2015年4月15日,即注射疫苗后的1个月,抗体保护率达到83%以上,90天时抗体有效保护率A组为66%以上,150天时抗体有效保护率下降到46%左右,则到9月份第2次免疫前免疫抗体有效保护率更低,试验牛已经失去抵御口蹄疫病毒感染的能力;B组第1次采血检测的抗体保护率达到达到96%以上,90天抗体有效保护率为76%以上,150天时抗体有效保护率下降到53%左右,到第2次免疫前免疫抗体有效保护稍低,试验牛机体内的抗体不能起到有效保护作用;C组第1次采血检测的抗体保护率达到达到93%以上,60天时抗体有效保护率为80%以上, 间隔120d(7月份)进行第2次免疫,第3次免疫前30d的有效保护率仍然在66%以上,试验牛常年处于抗体有效保护中。
  从试验结果看出,A组和C组的差异极显著,以C组为代表的每年3次、每次每头2.00mL的剂量进行免疫注射是长期保护牛抵御口蹄疫的最佳免疫方式。
       4 讨论
  从试验结果来看,虽然每年以两次免疫注射口蹄疫疫苗的A组省工省钱,但是免疫动物后期的抗体
有效保护率较低,易被野毒感染,给疫病的发生传播留下了机会;B组加大了免疫剂量,牛机体的免疫保护率有所提升,但仍然没有完全使动物常年处于免疫保护中;而C组虽然费工费时,费用比A、B组高,但是免疫动物抗体效价常年保持在一个相对均衡的水平上,起到了预防疫病的目的。因此,本试验推荐在生产中对牛使用每年注射3次、每次每头注射2.00mL的口蹄疫O型-亚洲Ⅰ型-A型三价灭活疫苗是最佳的免疫方案。
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