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寒地养殖
Cold farming

某牛场牛新型支原体感染继发魏氏梭菌感染的诊治

摘自:黑龙江畜牧兽医杂志发布时间:2018-11-01作者:admin浏览次数:87

1 实验室诊断


1.1 细菌的分离培养


用无菌接种环采集送检病死犊牛的脾脏、肺脏、肾脏等病料,分别接种于普通营养琼脂平板上,于37 ℃、CO2 需氧/ 厌氧条件培养24~48 h。在普通琼脂平板上长出表面光滑、半透明、圆形、中央隆起的菌落,且只在厌氧培养条件下生长。取单个菌落接种于血琼脂平板上,结果可见圆形、边缘整齐、中央隆起、灰白色、半透明的大菌落,菌落周围有棕色溶血环,有的菌落有双溶血环。同时挑取单个菌落进行革兰氏染色及显微镜观察,镜检结果为革兰氏阳性、两端钝
圆的粗大杆菌。

1.2 细菌的生化特性鉴定


按照细菌生化鉴定管的说明书,挑取纯化培养的菌落,接种于细菌微量生化鉴定管中进行生化试验。结果表明分离菌可以发酵葡萄糖、果糖、蔗糖、乳糖、麦芽糖,产酸产气,但不发酵木糖、甘露醇、山梨醇;硫化氢试验、明胶液化试验呈阳性,靛基质试验呈阴性;在含铁牛乳试验中,分离菌能分解乳糖,产酸,出现“汹涌发酵”现象。结果符合梭菌的生化特性。


1.3 药敏试验


挑取LB 营养琼脂平板上的单菌落于LB 液体培养基中进行增菌培养,培养约12 h 后,取0.5 mL 菌液,均匀涂布于LB 营养琼脂平板表面,待菌液吸收后贴上药敏纸片。药敏试验结果表明:分离菌对庆大霉素、多西环素、红霉素、林可霉素、阿莫西林、头孢曲松、氨苄西林低敏,对卡那霉素和链霉素中敏,对氧氟沙星高敏。


1.4 支原体PCR 检测


采集送检犊牛的脾脏、肺脏、肾脏及淋巴结,取适量混合研磨,反复冻融3 次,匀浆器磨20 min 后收集匀浆液,12 000 r/ min 离心10 min,按支原体PCR 检测核酸提取试剂盒使用说明书的方法对上清液提取DNA。用支原体PCR 检测试剂盒(北京世纪元亨动物防疫技术有限公司产品)进行PCR 核酸检测。反应体系:PCR 反应液16 μL,Tap DNA 聚合酶2 μL,模板DNA 2 μL,总体积20 μL。反应程序:94 ℃预变性3 min;94 ℃变性30 s,50 ℃退火30 s,72 ℃延伸45 s,35 个循环;72 ℃ 延伸10 min。反应结束后取5 μLPCR 产物于1%琼脂糖凝胶中进行电泳检测(90 V,35 min),凝胶成像系统拍照记录。结果检出支原体特异性阳性条带。


1.5 病毒的RT-PCR 检测


将上述收集的匀浆液12 000 r/ min 离心10 min,取上清液,用TaKaRa MinBEST Viral DNA/ RNAExtraction Kit Ver.5.0 试剂盒分别提取总RNA,进行牛病毒性腹泻-黏膜病病毒的RT-PCR 扩增。反应结束后取5 μL PCR 产物于1% 1×TAE 琼脂糖凝胶中进行电泳检测(90 V,35 min),用凝胶成像系统拍照记录。结果病料中未检测出牛病毒性腹泻-黏膜病特异性阳性条带,说明送检犊牛并非牛病毒性腹泻-黏膜病病毒感染。


2 诊断结果


根据临床症状、病理剖检、细菌的分离培养、细菌染色镜检、生化特性鉴定及支原体核酸PCR 检测,确诊该牛场患病死亡犊牛为支原体感染及继发魏氏梭菌感染。


3 防治


首先对有临床症状的发病牛进行隔离,对支原体肺炎继发魏氏梭菌感染犊牛进行治疗:口服左氧氟沙星(100 mg/ 片)1 片/ 次,2 次/ d;肌肉注射硫酸卡那霉素注射液( 10 mL ∶ 1 000 mg), 按体重10 ~15 mg/ kg,每天2 次,连用3~5 d;同时辅助使用三磷酸腺苷(ATP)、维生素C 和葡萄糖注射液静脉注射。成年牛根据体重用量加倍。对病死牛尸体进行消毒深埋,并对污染物及弃尸地进行消毒,圈舍、用具等用10%石灰乳或5%氢氧化钠溶液严格消毒,垫草等污染物焚烧处理;粪便堆积后用5%氢氧化钠溶液表面消毒后进行生物热处理。其次对牛进行支原体疫苗免疫接种,能有效预防和控制支原体肺炎的发生;在母牛产前2 个月时注射支原体疫苗进行免疫,在产前
1 个月时再进行加强免疫1 次,每头牛接种4.0 mL,能起到很好的预防效果。根据以上防治手段进行控制后该牛场病牛在1 个月后病情得到了有效控制,发病牛病情好转率达66%。


石远菊1,胡玲玲1,马 萍2,汤德元1∗,曾智勇1,王 彬1,黄 涛1,龙冬梅1,杨 伟1,叶 丽1,郭倩妤1,廖少山1,刘巧玲1

(1.贵州大学动物科学学院,贵阳550025;2.贵州省动物疫病预防控制中心,贵阳550008)




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