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寒地养殖
Cold farming

应用SSCP标记对东北细毛羊多胎基因(FecB)型检测的研究

摘自:黑龙江畜牧兽医杂志社发布时间:2018-02-26作者:admin浏览次数:915

       繁殖力是动物生产的重要经济指标,提高繁殖力可以提高产仔数,进而提高畜产品产量。目前,肉羊一般都产单羔而且季节性繁殖,因此生产效率低[1-2]。小尾寒羊产羔率相对较高,但小尾寒羊肉质相对较差。东北细毛羊肉质好,耐寒,抗病力强。利用肉羊的多胎选育技术,与德肉美相互杂交改良,提高东北细毛羊的产羔率,使黑龙江肉羊整体产肉量增加。肉羊的多胎性状是由其基因型决定的,因此是可遗传的,母羊多胎性的遗传力为0.1~0.3[3-4]。生产实践中,东北细毛羊母羊可以产双羔。可以通过表型选择和基因型选择来提高产羔率的遗传进展,以提高经济效益[5-6]。东北细毛羊多胎(FecB)基因的遗传效应是增加排卵数和产羔数。目前,研究致力于多胎肉羊新品种培育的研究,为做好选种选配工作,在东北细毛羊中选择携带FecB基因的母羊育种,并进行后代生产性能测定,来加快培育适合黑龙江省生态环境并且生产性能稳定的肉用绵羊高繁新品种(系),从而促进黑龙江养羊业快速发展。
      1 材料
      1.1 试验动物
      103只东北细毛羊,均来自齐齐哈尔市德美萨肉羊繁育有限公司。
      1.2 试验药品

       试验用rTaq酶、10×Buffer、dNTP、琼脂糖等试剂,均购自哈尔滨欣科瑞经贸有限公司。
      2 方法
      2.1 样品的采集
      根据羊的产羔记录,有针对性地选取产双羔的肉羊样本。用专制带有挡板的采样剪刀采集羊耳组织,用准备好的75%乙醇棉球擦拭耳部,剪刀也要用棉球.

      2.2 基因组DNA的提取采用酚、氯仿、异戊醇方法对耳组织进行基因组DNA抽提。
      2.3 引物的设计与合成
      根据绵羊BMPR-IB基因(GenBank登录号为AF357007、AF298885)序列设计1对强制产生限制性酶切位点AvaⅡ(g/gtcc)的上、下游引物,预期扩增片段长度为187bp,用于SSCP标记。引物序列:上游引物5′-AGATTGGAAAAGGTCGCTATG-3′,下游引物5′-ACCCTGAACATCGCTAATACA-3′。
       2.4 体尺、体重的测定
       羔羊出生2小时和3月龄断奶时称重,并测量体重、体高、体长、胸围。
       2.5 记录产羔数
       记录东北细毛羊产羔数量,严格对应耳号。
      3 结果与分析
      3.1 基因组的提取结果

       选取24个个体的基因组图片,103个样本基因组没有发生降解,可以进行后续试验。
       3.2 SSCP检测结果
       3.2.1 PCR反应体系 反应体系(10μL):纯化水6.9μL,30ng/μLDNA模板0.5μL,10×Buffer1.0μL,2.5mmol/LdNTP1.0μL,10pmol/μL上、下游引物各0.25μL,0.5U/μLrTaq聚合酶0.1μL。
      3.2.2 PCR反应循环参数 94.0℃预变性5min;94.0℃变性30s,54.0℃退火30s,72.0℃延伸30s,共33个循环;72.0℃再延伸5min。
       3.2.3 PCR产物电泳结果 试验用肉羊模板进行PCR扩增,产物用1%琼脂糖胶电泳检测,特异性扩增良好,没有非特异条带,可以用来进行SSCP检测分析。
       3.2.4 SSCP电泳结果 所测103个个体的电泳SSCP分析结果表明,产生3种基因型。2个FecB拷贝的携带者为BB基因型,1个FecB拷贝的携带者为B+基因型,FecB拷贝的非携带者为++基因型。
       3.3 基因型母羊数量
       1.空白对照;2~17.PCR产物;M.DL-2000Marker.PCR扩增结果1,2,4,6,7.B+基因型;3,8.BB基因型;5.++基因型。
       3.5 产羔率与羔羊各项生产性能相关性的研究
        3.5.1 初生重与体尺 结果见表3。
   东北细毛羊母羊BB基因型所产羔羊平均初生重为3.42kg,B+基因型所产羔羊平均初生重为3.56kg,而++基因型所产羔羊平均初生重为4.75kg,++基因型比BB和B+基因型分别高1.33kg、1.19kg,且差异极显著(P<0.01);体高、体长、胸围均为++基因型母羊后代显著高于BB和B+基因型母羊后代(P<0.05)。表明母羊的产羔率.同列同项数据肩标大写字母不同表示差异极显著(P<0.01),小写字母不同表示差异显著(P<0.05),小写字母相同或无肩标表示差异不显著(P>0.05)。
  东北细毛羊母羊BB、B+基因型与++ 基因型母羊所产羔羊断奶体重分别为23.50kg、23.72kg、24.69kg,不同基因型断奶重与体尺之间差异不显著(P>0.05)。
       4 结论
      试验中,BB和B+基因型母羊的每胎产羔数分别为2.00只、1.97只,++基因型母羊的每胎产羔数为1.00只,表明FecB基因是控制东北细毛羊肉羊多羔性状的主效基因。BB和B+基因型母羊可以留作种用,而且可优先选配带多胎基因的公羊,这可以加快育成东北细毛羊肉羊多胎品系的速度[7]。3月龄断奶体重和体尺与单胎羔羊的体尺与体重差异不显著,说明早期生长发育快能稳定遗传。研究结果将直接推动和加速黑龙江省肉羊多胎品系的育种工作,具有重大的理论意义和实践价值。

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