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有丝分裂原刺激多浪羊淋巴细胞体外培养研究

摘自:黑龙江畜牧兽医杂志发布时间:2018-10-09作者:admin浏览次数:199

自从有丝分裂原促进剂能使得淋巴细胞增殖发现以来,它不但被用作激活间期细胞、促细胞增殖等生化研究及观察染色体的手段,而且还为阐明淋巴细胞的起源、分化和功能分工做出巨大贡献。淋巴细胞进行有丝分裂,需要有刺激剂刺激淋巴细胞。肌注PHA对猫血液中淋巴细胞的实验表明适量的对猫血液中淋巴细胞的试验结果表明,适量的PHA能显著地促进淋巴细胞升高能显著地促进淋巴细胞增多,增强免疫功能,有免疫促进作用。PHA是植物血凝素类多克隆刺激剂,可诱导细胞活化、增殖,在大剂量情况下,会在培养72 h后发生明显的活化诱导的细胞死亡现象,5 μg / mL是选择比较常规的剂量,如果想培养时间更长一些,可以试着降到1 μg/mL 。在特定条件下,T细胞可产生迟发型过敏反应。LPS可使巨噬细胞活化增殖,并且吞噬功能明显增强。LPS浓度在1 μg/mL、作用24 h可充分诱导活化巨噬细胞,同时巨噬细胞具有吞噬鸡红细胞的能力。外周血淋巴细胞在外源有丝分裂原作用下发生幼稚化并分裂和增殖。

本实验选择的是在本试验选择的有丝分裂原是在PHA(5 μg/mL)和LPS(5 μg/mL)时,观察多浪羊淋巴细胞其经过PHA和LPS有丝分裂原刺激后的形态变化。,变化为结果表明:由健康多浪羊外周血建立的淋巴细胞培养系在原代培养的前12 h基本没有分裂增殖。从细胞浓度来看,这期间的细胞数量不但没有增加反而有所下降,这是由于分离和培养过程中一些细胞失去活力并渐渐碎裂。经有丝分裂原刺激的多数淋巴细胞在12 h小时发生显著变化,形态上表现为细胞体积明显增大(直径可增加一倍以上直径可增加1倍以上),大部分为圆形,也有不规则形、,多突触、,有时可见空泡;具贴壁生长和集群生长能力,蛋白质和核酸的量增加。PHA和LPS可使巨噬细胞活化增殖,并且吞噬功能明显增强。经有丝分裂原刺激后,培养淋巴细胞的数量和形态均有变化,但形态的变化更为明显,表现为淋巴细胞体积增大,细胞核物质增多,有些巨噬细胞伪足出现,贴壁的巨噬细胞数量增加等。随着培养时间的增加,死亡的淋巴细胞数量也有所增加。

有丝分裂原刺激多浪羊淋巴细胞可以在体外进行短期培养,淋巴细胞随着作用时间的延长,其细胞核物质增多,巨噬细胞伪足出现、贴壁的巨噬细胞和淋巴细胞死亡数量增加,进一步说明体外培养的免疫因子淋巴细胞进行有丝分裂需要外源刺激,其经过外源刺激后,其分裂、分化的速度加快。从本质上说,也说明了免疫学因子发生免疫学变化是需要外界诱导,淋巴细胞在接受抗原刺激后能被激活而产生相应的抗体和淋巴因子,为今后深入研究多浪羊的免疫相关因子的机理奠定基础。


高学丽1,李莲瑞2,3*

(1.塔里木大学  生命科学学院,新疆  阿拉尔 843300;2.新疆生产建设兵团  塔里木畜牧科技重点实验室 ,新疆 阿拉尔 843300;3.塔里木大学 动物科学学院,新疆 阿拉尔843300)




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